IPTG CAS:367-93-1 Արտադրողի գին
Իզոպրոպիլ β-D-1-թիոգալակտոպիրանոզիդը (IPTG) լակտոզայի սինթետիկ անալոգ է, որը սովորաբար օգտագործվում է մոլեկուլային կենսաբանության հետազոտության և կենսատեխնոլոգիայի կիրառություններում:IPTG-ն հիմնականում օգտագործվում է բակտերիալ համակարգերում գեների էքսպրեսիան հրահրելու համար, որտեղ այն ծառայում է որպես մոլեկուլային ձգան՝ թիրախ գեների տրանսկրիպցիան սկսելու համար:
Երբ ավելացվում է աճի միջավայրին, IPTG-ն ընդունվում է բակտերիաների կողմից և կարող է կապվել լաքի ռեպրեսորային սպիտակուցի հետ՝ թույլ չտալով այն արգելափակել լաք օպերոնի ակտիվությունը:Լակ օպերոնը լակտոզայի նյութափոխանակության մեջ ներգրավված գեների կլաստեր է, և երբ ռեպրեսորային սպիտակուցը հեռացվում է, գեները արտահայտվում են:
IPTG-ն հաճախ օգտագործվում է lacUV5 մուտանտի խթանիչի հետ համատեղ, որը հանդիսանում է lac պրոմոութերի սկզբունքորեն ակտիվ տարբերակ:Համատեղելով IPTG-ի ինդուկցիան այս մուտանտի խթանիչի հետ՝ հետազոտողները կարող են հասնել գեների արտահայտման բարձր մակարդակի:Սա թույլ է տալիս արտադրել մեծ քանակությամբ սպիտակուցներ մաքրման կամ ներքևում գտնվող այլ կիրառությունների համար:
Ի լրումն գեների արտահայտման, IPTG-ն հաճախ օգտագործվում է նաև կապույտ/սպիտակ սքրինինգային վերլուծություններում:Այս տեխնիկայում lacZ գենը սովորաբար միաձուլվում է հետաքրքրող գենի հետ, և բակտերիաները, որոնք հաջողությամբ արտահայտում են այս միաձուլման գենը, կարտադրեն ակտիվ β-գալակտոզիդազ ֆերմենտ:Երբ IPTG-ն ավելացվում է քրոմոգեն սուբստրատի հետ, ինչպիսին է X-gal-ը, բակտերիաները, որոնք արտահայտում են միաձուլման գենը, կապույտ են դառնում β-գալակտոզիդազի ակտիվության պատճառով:Սա թույլ է տալիս նույնականացնել և ընտրել ռեկոմբինանտ շտամներ, որոնք հաջողությամբ ինտեգրել են հետաքրքրող գենը:
Գենի արտահայտման ինդուկցիա. IPTG-ն սովորաբար օգտագործվում է բակտերիալ համակարգերում թիրախ գեների արտահայտումը հրահրելու համար:Այն ընդօրինակում է բնական ինդուկտոր կաթնաշաքարը և կապվում է լաք ռեպրեսորային սպիտակուցին, թույլ չտալով այն արգելափակել լաք օպերոնը:Սա թույլ է տալիս տառադարձել և արտահայտել ցանկալի գեները:
Սպիտակուցի արտահայտություն և մաքրում. IPTG-ի ինդուկցիան հաճախ օգտագործվում է տարբեր նպատակների համար մեծ քանակությամբ ռեկոմբինանտ սպիտակուցներ արտադրելու համար, ինչպիսիք են կենսաքիմիական հետազոտությունները, բուժական արտադրությունը կամ կառուցվածքային վերլուծությունը:Օգտագործելով համապատասխան արտահայտման վեկտորներ և IPTG ինդուկցիա՝ հետազոտողները կարող են հասնել բակտերիալ հյուրընկալողներում թիրախային սպիտակուցի արտադրության բարձր մակարդակի:
Կապույտ/սպիտակ սքրինինգ. IPTG-ն հաճախ օգտագործվում է lacZ գենի և քրոմոգեն սուբստրատի հետ միասին, ինչպիսին է X-gal-ը, կապույտ/սպիտակ սքրինինգի վերլուծության համար:LacZ գենը սովորաբար միաձուլվում է հետաքրքրող գենին, և բակտերիաները, որոնք հաջողությամբ արտահայտում են այս միաձուլման գենը, կարտադրեն ակտիվ β-գալակտոզիդազ ֆերմենտ:Երբ IPTG-ն և քրոմոգեն սուբստրատը ավելացվում են, միաձուլման գենն արտահայտող ռեկոմբինանտ շտամները դառնում են կապույտ, ինչը թույլ է տալիս հեշտ նույնականացում և ընտրություն:
Գենի կարգավորման ուսումնասիրություն. IPTG-ի ինդուկցիան սովորաբար օգտագործվում է հետազոտության մեջ՝ ուսումնասիրելու գեների և օպերոնների կարգավորումը, մասնավորապես լաք օպերոնը:Շահարկելով IPTG-ի կոնցենտրացիաները և վերահսկելով լաք օպերոնի բաղադրիչների արտահայտումը, հետազոտողները կարող են ուսումնասիրել գեների կարգավորման մեխանիզմները և տարբեր գործոնների կամ մուտացիաների դերը:
Գենային արտահայտման համակարգեր. IPTG-ն որոշիչ բաղադրիչ է գեների արտահայտման մի քանի համակարգերում, ինչպիսին է T7 խթանիչի վրա հիմնված համակարգերը:Այս համակարգերում lac պրոմոուտերը հաճախ օգտագործվում է T7 ՌՆԹ պոլիմերազի էքսպրեսիան խթանելու համար, որն իր հերթին տառադարձում է թիրախային գեները՝ T7 պրոմոտորների հաջորդականությունների հսկողության ներքո:IPTG-ն օգտագործվում է T7 RNA պոլիմերազի էքսպրեսիան հրահրելու համար, ինչը հանգեցնում է թիրախ գենի արտահայտման ակտիվացմանը:
| Կազմը | C9H18O5S |
| Վերլուծություն | 99% |
| Արտաքին տեսք | Սպիտակ փոշի |
| CAS No. | 367-93-1 |
| Փաթեթավորում | Փոքր և մեծաքանակ |
| Պահպանման ժամկետը | 2 տարի |
| Պահպանում | Պահել զով և չոր տարածքում |
| Հավաստագրում | ISO. |
