4-Նիտրոֆենիլ բետա-D-գալակտոպիրանոզիդ CAS:200422-18-0

Ազդեցություն. ONPG-ը սուբստրատ է, որը հատուկ օգտագործվում է β-գալակտոսիդազ ֆերմենտի առկայությունը և ակտիվությունը հայտնաբերելու համար:Երբ β-գալակտոզիդազ ֆերմենտը առկա է և ակտիվ, այն բաժանում է ONPG-ն երկու արտադրանքի՝ o-nitrophenol և galactose ածանցյալ:O-nitrophenol-ի ազատումը հանգեցնում է դեղին գույնի փոփոխության, որը կարելի է չափել սպեկտրոֆոտոմետրի միջոցով:

Կիրառում. ONPG-ն մի քանի կիրառություն ունի մոլեկուլային կենսաբանության և կենսաքիմիայի հետազոտության մեջ.

β-գալակտոզիդազայի ակտիվության որոշում. ONPG-ն սովորաբար օգտագործվում է β-գալակտոզիդազ ֆերմենտի ակտիվությունը չափելու և քանակականացնելու համար:Օ-նիտրոֆենոլի առաջացման արագությունը, որն ուղիղ համեմատական ​​է ֆերմենտի ակտիվությանը, կարող է չափվել սպեկտրոֆոտոմետրիկ եղանակով:

Գենի արտահայտությունը և կարգավորումը. ONPG-ն հաճախ օգտագործվում է գեների արտահայտման և կարգավորման ուսումնասիրությունների հետ կապված փորձերում:Այն հաճախ օգտագործվում է միաձուլման սպիտակուցների վերլուծության մեջ, ինչպես, օրինակ, սովորաբար օգտագործվող lacZ միաձուլման համակարգը, հատուկ խթանիչների հսկողության տակ գտնվող գեների էքսպրեսիան ուսումնասիրելու համար:ONPG-ի միջոցով չափված բետա-գալակտոզիդազային ակտիվությունը պատկերացումներ է տալիս գեների արտահայտման մակարդակի վերաբերյալ:

β-գալակտոզիդազայի ակտիվության ստուգում. ONPG-ը կարող է օգտագործվել որպես ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիայի գունաչափական սկրինինգի մեթոդ՝ բացահայտելու LacZ գենի առկայությունը և ֆունկցիոնալությունը, որը կոդավորում է β-գալակտոսիդազը:Սքրինինգի այս մեթոդը օգնում է բացահայտելու հետաքրքրող գենը պարունակող կլոնները:

Ֆերմենտների կինետիկայի ուսումնասիրություններ. ONPG-ն օգտակար է նաև β-գալակտոզիդազ ֆերմենտի կինետիկան ուսումնասիրելու համար:Չափելով ֆերմենտ-սուբստրատ ռեակցիայի արագությունը սուբստրատի տարբեր կոնցենտրացիաներում, հնարավոր է որոշել կինետիկ պարամետրերը, ինչպիսիք են Michaelis-Menten հաստատունները (կմ) և ռեակցիայի առավելագույն արագությունները (Vmax):