4-Նիտրոֆենիլ բետա-D-գալակտոպիրանոզիդ CAS:200422-18-0

Ազդեցություն. ONPG-ն սուբստրատ է, որն օգտագործվում է β-գալակտոզիդազ ֆերմենտի առկայությունը և ակտիվությունը հայտնաբերելու համար: Երբ β-գալակտոզիդազ ֆերմենտը առկա է և ակտիվ, այն ONPG-ն բաժանում է երկու արգասիքների՝ o-նիտրոֆենոլի և գալակտոզայի ածանցյալի: O-նիտրոֆենոլի արտազատումը հանգեցնում է դեղին գույնի փոփոխության, որը կարելի է չափել սպեկտրոֆոտոմետրի միջոցով:

Կիրառություն. ONPG-ն մի քանի կիրառություն ունի մոլեկուլային կենսաբանության և կենսաքիմիայի հետազոտություններում.

β-գալակտոզիդազի ակտիվության որոշում. ONPG-ն սովորաբար օգտագործվում է β-գալակտոզիդազ ֆերմենտի ակտիվությունը չափելու և քանակականացնելու համար: O-նիտրոֆենոլի առաջացման արագությունը, որը ուղիղ համեմատական ​​է ֆերմենտի ակտիվությանը, կարող է չափվել սպեկտրոֆոտոմետրիկորեն:

Գեների արտահայտում և կարգավորում. ONPG-ն հաճախ օգտագործվում է գեների արտահայտման և կարգավորման ուսումնասիրությունների հետ կապված փորձերում: Այն հաճախ օգտագործվում է միաձուլված սպիտակուցների փորձարկումներում, ինչպիսին է լայնորեն օգտագործվող lacZ միաձուլված համակարգը, գեների արտահայտումը որոշակի պրոմոտորների վերահսկողության տակ ուսումնասիրելու համար: ONPG-ի միջոցով չափված բետա-գալակտոզիդազի ակտիվությունը հնարավորություն է տալիս պատկերացում կազմել գեների արտահայտման մակարդակի մասին:

β-գալակտոզիդազի ակտիվության սկրինինգ. ONPG-ն կարող է օգտագործվել որպես գունաչափական սկրինինգի մեթոդ ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիայում՝ β-գալակտոզիդազը կոդավորող LacZ գենի առկայությունը և ֆունկցիոնալությունը պարզելու համար: Այս սկրինինգի մեթոդը օգնում է նույնականացնել հետաքրքրության գենը պարունակող կլոնները:

Ֆերմենտային կինետիկայի ուսումնասիրություններ. ONPG-ն օգտակար է նաև β-գալակտոզիդազ ֆերմենտի կինետիկայի ուսումնասիրության համար: Ֆերմենտ-սուբստրատ ռեակցիայի արագությունը տարբեր սուբստրատի կոնցենտրացիաներում չափելով՝ հնարավոր է որոշել կինետիկ պարամետրեր, ինչպիսիք են Միքայելիս-Մենտենի հաստատունները (Km) և ռեակցիայի առավելագույն արագությունները (Vmax):