Dithiothreitol (DTT) սովորաբար օգտագործվող նվազեցնող միջոց է, որը նաև հայտնի է որպես նոր կանաչ հավելում:Այն փոքր մոլեկուլային օրգանական միացություն է՝ երկու մերկապտան խմբերով (-SH):Իր նվազեցնող հատկությունների և կայունության շնորհիվ DTT-ն լայնորեն օգտագործվում է կենսաքիմիայի և մոլեկուլային կենսաբանության փորձերում:
DTT-ի հիմնական դերը սպիտակուցների և այլ կենսամոլեկուլների դիսուլֆիդային կապերի նվազեցումն է:Դիսուլֆիդային կապը սպիտակուցի ծալման և կայունության կարևոր մասն է, սակայն որոշակի փորձարարական պայմաններում, ինչպիսիք են՝ վերականգնվող SDS-PAGE վերլուծությունը, սպիտակուցի վերահամակցումը և ծալումը, անհրաժեշտ է դիսուլֆիդային կապը կրճատել մինչև երկու թիոլ խմբեր՝ պարզելու համար տարածական կառուցվածքը: սպիտակուցը.DTT-ն կարող է արձագանքել դիսուլֆիդային կապերի հետ՝ դրանք վերածելով մերկապտան խմբերի, այդպիսով բացելով սպիտակուցի տարածական կառուցվածքը և հեշտացնելով այն վերլուծելն ու շահարկելը:
DTT-ը կարող է օգտագործվել նաև ֆերմենտների ակտիվությունը և կայունությունը պաշտպանելու համար:Որոշ ֆերմենտային կատալիզացված ռեակցիաներում ֆերմենտի ակտիվությունը կարող է կրճատվել օքսիդանտի կողմից:DTT-ն կարող է արձագանքել օքսիդանտների հետ՝ դրանք վերածելով անվնաս նյութերի, դրանով իսկ պաշտպանելով ֆերմենտի ակտիվությունն ու կայունությունը:
Համեմատած ավանդական վերականգնող նյութերի հետ, ինչպիսիք են β-մերկապտոէթանոլը (β-ME), DTT-ն համարվում է ավելի անվտանգ և կայուն վերականգնող նյութ:Այն ոչ միայն կայուն է ջրային լուծույթում, այլև պահպանում է իր վերականգնող հատկությունները բարձր ջերմաստիճանի և թթու-բազային պայմաններում։
DTT-ի օգտագործումը համեմատաբար պարզ է:Ընդհանուր առմամբ, DTT-ը լուծարվում է համապատասխան բուֆերում, այնուհետև ավելացվում է փորձարարական համակարգին:DTT-ի օպտիմալ կոնցենտրացիան պետք է որոշվի ըստ կոնկրետ փորձի և սովորաբար օգտագործվում է 0,1-1 մՄ միջակայքում:Ավելի ցածր կոնցենտրացիաները կարող են նվազեցնել անբարենպաստ ազդեցությունները բջիջների աճի վրա և կարող են նվազեցնել ցիտոտոքսիկությունը թիրախային սպիտակուցների գերարտահայտման պատճառով:Ավելի բարձր կոնցենտրացիաները կարող են առաջացնել բջիջների նյութափոխանակության ավելցուկային բեռ՝ ազդելով բջիջների աճի և արտահայտման արդյունավետության վրա:
Օպտիմալ կոնցենտրացիան որոշելու ճանապարհը կարող է լինել թիրախային սպիտակուցի արտահայտման մակարդակի գնահատումը տարբեր կոնցենտրացիաներում IPTG ինդուկցիոն թեստեր անցկացնելով:Փոքր մասշտաբի կուլտուրայի թեստերը կարող են իրականացվել օգտագործելով IPTG կոնցենտրացիաների մի շարք (օրինակ՝ 0,1 մՄ, 0,5 մՄ, 1 մՄ և այլն), և տարբեր կոնցենտրացիաներում արտահայտման ազդեցությունը կարող է գնահատվել թիրախային սպիտակուցի արտահայտման մակարդակը հայտնաբերելու միջոցով (օրինակ՝ արևմտյան բլոտի կամ ֆլուորեսցենտային հայտնաբերում):Ըստ փորձարարական արդյունքների, որպես օպտիմալ կոնցենտրացիան ընտրվել է լավագույն արտահայտչական ազդեցություն ունեցող կոնցենտրացիան:
Բացի այդ, դուք կարող եք նաև հղում կատարել համապատասխան գրականությանը կամ այլ լաբորատորիաների փորձին՝ հասկանալու համար սովորաբար օգտագործվող IPTG կոնցենտրացիայի տիրույթը նմանատիպ փորձարարական պայմաններում, այնուհետև օպտիմալացնել և հարմարեցնել փորձարարական կարիքներին համապատասխան:
Կարևոր է նշել, որ օպտիմալ կոնցենտրացիան կարող է տարբեր լինել՝ կախված արտահայտման տարբեր համակարգերից, թիրախային սպիտակուցներից և փորձարարական պայմաններից, ուստի լավագույնն այն է, որ օպտիմալացնելը յուրաքանչյուր դեպքի հիման վրա:
Ամփոփելով, DTT-ն սովորաբար օգտագործվող վերականգնող նյութ է, որը կարող է օգտագործվել սպիտակուցների և այլ կենսամոլեկուլների դիսուլֆիդային կապերը նվազեցնելու և ֆերմենտի ակտիվությունն ու կայունությունը պաշտպանելու համար:Այն լայնորեն կիրառվել է կենսաքիմիայի և մոլեկուլային կենսաբանության փորձերում։
Հրապարակման ժամանակը՝ Sep-28-2023