Դիթիոթրեիտոլը (DTT) լայնորեն օգտագործվող վերականգնող նյութ է, որը հայտնի է նաև որպես նոր կանաչ հավելանյութ: Այն փոքր մոլեկուլային օրգանական միացություն է՝ երկու մերկապտանային խմբերով (-SH): Իր վերականգնող հատկությունների և կայունության շնորհիվ DTT-ն լայնորեն կիրառվում է կենսաքիմիայի և մոլեկուլային կենսաբանության փորձերում:
DTT-ի հիմնական դերը սպիտակուցներում և այլ կենսամոլեկուլներում դիսուլֆիդային կապերի նվազեցումն է: Դիսուլֆիդային կապը սպիտակուցի ծալման և կայունության կարևոր մասն է կազմում, սակայն որոշակի փորձարարական պայմաններում, ինչպիսիք են վերականգնվող SDS-PAGE վերլուծությունը, սպիտակուցի վերակոմբինացիան և ծալումը, անհրաժեշտ է դիսուլֆիդային կապը վերականգնել երկու թիոլային խմբերի՝ սպիտակուցի տարածական կառուցվածքը բացահայտելու համար: DTT-ն կարող է ռեակցիայի մեջ մտնել դիսուլֆիդային կապերի հետ՝ դրանք վերականգնելով մերկապտանային խմբերի, այդպիսով բացելով սպիտակուցի տարածական կառուցվածքը և հեշտացնելով դրա վերլուծությունն ու մանիպուլյացիան:
DTT-ն կարող է նաև օգտագործվել ֆերմենտային ակտիվությունը և կայունությունը պաշտպանելու համար: Որոշ ֆերմենտային կատալիզացված ռեակցիաներում ֆերմենտի ակտիվությունը կարող է նվազել օքսիդանտի ազդեցությամբ: DTT-ն կարող է ռեակցիայի մեջ մտնել օքսիդանտների հետ՝ դրանք վերականգնելով անվնաս նյութերի, այդպիսով պաշտպանելով ֆերմենտի ակտիվությունը և կայունությունը:
Համեմատած ավանդական վերականգնող նյութերի, ինչպիսին է β-մերկապտոէթանոլը (β-ME), համեմատած DTT-ն համարվում է ավելի անվտանգ և կայուն վերականգնող նյութ։ Այն ոչ միայն կայուն է ջրային լուծույթում, այլև պահպանում է իր վերականգնող հատկությունները բարձր ջերմաստիճանի և թթվահիմնային պայմաններում։
DTT-ի կիրառումը համեմատաբար պարզ է: Ընդհանուր առմամբ, DTT-ն լուծվում է համապատասխան բուֆերում, ապա ավելացվում է փորձարարական համակարգին: DTT-ի օպտիմալ կոնցենտրացիան պետք է որոշվի կոնկրետ փորձի համաձայն և սովորաբար օգտագործվում է 0.1-1 մՄ միջակայքում: Ավելի ցածր կոնցենտրացիաները կարող են նվազեցնել բջիջների աճի վրա անբարենպաստ ազդեցությունները և կարող են նվազեցնել թիրախային սպիտակուցների գերարտահայտման պատճառով ցիտոտոքսիկությունը: Ավելի բարձր կոնցենտրացիաները կարող են առաջացնել բջիջների չափազանց մեծ նյութափոխանակության բեռ՝ ազդելով բջիջների աճի և արտահայտման արդյունավետության վրա:
Օպտիմալ կոնցենտրացիան որոշելու միջոցը կարող է լինել թիրախային սպիտակուցի արտահայտման մակարդակի գնահատումը՝ տարբեր կոնցենտրացիաներով IPTG ինդուկցիոն թեստեր անցկացնելով: Փոքրածավալ կուլտուրայի թեստեր կարող են իրականացվել՝ օգտագործելով IPTG կոնցենտրացիաների մի շարք (օրինակ՝ 0.1 մՄ, 0.5 մՄ, 1 մՄ և այլն), և տարբեր կոնցենտրացիաներում արտահայտման ազդեցությունը կարող է գնահատվել թիրախային սպիտակուցի արտահայտման մակարդակը հայտնաբերելով (օրինակ՝ Western blot կամ ֆլուորեսցենտային հայտնաբերում): Փորձարարական արդյունքների համաձայն՝ լավագույն արտահայտման ազդեցություն ունեցող կոնցենտրացիան ընտրվել է որպես օպտիմալ կոնցենտրացիա:
Բացի այդ, դուք կարող եք նաև դիմել համապատասխան գրականությանը կամ այլ լաբորատորիաների փորձին՝ նմանատիպ փորձարարական պայմաններում IPTG կոնցենտրացիայի լայնորեն կիրառվող միջակայքը հասկանալու համար, այնուհետև օպտիմալացնել և ճշգրտել այն՝ համաձայն փորձարարական կարիքների:
Կարևոր է նշել, որ օպտիմալ կոնցենտրացիան կարող է տարբեր լինել՝ կախված տարբեր արտահայտման համակարգերից, թիրախային սպիտակուցներից և փորձարարական պայմաններից, ուստի լավագույնն է օպտիմալացնել յուրաքանչյուր դեպքի համար առանձին։
Ամփոփելով՝ DTT-ն լայնորեն օգտագործվող վերականգնող նյութ է, որը կարող է օգտագործվել սպիտակուցներում և այլ կենսամոլեկուլներում դիսուլֆիդային կապերը նվազեցնելու և ֆերմենտային ակտիվությունն ու կայունությունը պաշտպանելու համար: Այն լայնորեն օգտագործվել է կենսաքիմիայի և մոլեկուլային կենսաբանության փորձերում:
Հրապարակման ժամանակը. Սեպտեմբերի 28-2023