Մեր շուրջը կան բազմաթիվ չգովերգված հերոսներ, ովքեր թվում են սովորական, բայց իրականում նրանք լուռ մեծ ներդրում ունեն մեզ համար: Պրոտեինազ K-ն մոլեկուլային ախտորոշման ոլորտի «չգովերգված հերոսն» է, չնայած ոլորտի «մեծերի և հզորների» համեմատ, պրոտեինազ K-ն այնքան աննշան է, որ մենք վաղուց անտեսել ենք դրա կարևորությունը: Նոր համաճարակի բռնկման հետ մեկտեղ պրոտեինազ K-ի պահանջարկը կտրուկ աճել է, և մատակարարումը ինչպես երկրում, այնպես էլ արտերկրում զգալիորեն հետ է մնում սպառումից, և բոլորը հանկարծ հասկացան, որ պրոտեինազ K-ն այդքան կարևոր է:
Ի՞նչ է պրոտեինազ K-ի օգտագործումը։
Պրոտեինազ K-ն սերինային պրոտեազ է՝ պրոտեոլիտիկ ֆերմենտային ակտիվությամբ և կարող է պահպանել ակտիվությունը լայն միջավայրերում (pH (4-12.5), աղի բարձր պարունակությամբ բուֆեր, 70°C բարձր ջերմաստիճան և այլն): Բացի այդ, պրոտեինազ K-ի ակտիվությունը չի արգելակվում SDS-ով, միզանյութով, EDTA-ով, գուանիդինի հիդրոքլորիդով, գուանիդինի իզոտիոցիանատով և այլն, իսկ որոշակի քանակությամբ լվացող միջոցը նույնպես կարող է ուժեղացնել պրոտեինազ K-ի ակտիվությունը: Բժշկական բուժման (վիրուսային և մանրէային ախտահանում), սննդի (մսի փափկեցում), կաշվի փափկեցում, գինեգործություն (սպիրտի մաքրում), ամինաթթուների պատրաստման (քայքայված փետուրներ), նուկլեինաթթվի արդյունահանման, in situ հիբրիդացման և այլն ոլորտներում, պրոտեինազ K-ն ունի կիրառություններ: Առավել հաճախ օգտագործվող կիրառությունը նուկլեինաթթվի արդյունահանումն է:
Պրոտեինազ K-ն կարող է ֆերմենտացնել նմուշում առկա բոլոր տեսակի սպիտակուցները, այդ թվում՝ այն հիստոնները, որոնք ամուր կապված են նուկլեինաթթուների հետ, որպեսզի նուկլեինաթթուները կարողանան ազատվել նմուշից և արտազատվել քաղվածքի մեջ՝ նպաստելով հաջորդ քայլին՝ արդյունահանմանը և մաքրմանը: Վիրուսային նուկլեինաթթվի հայտնաբերման դեպքում պրոտեինազ K-ն վիրուսային նմուշառման լուծույթի կարևոր բաղադրիչներից մեկն է: Պրոտեինազ K-ն կարող է ճաքել և ինակտիվացնել վիրուսի պատյանի սպիտակուցը, որն ավելի անվտանգ է տեղափոխման և հայտնաբերման փուլում. բացի այդ, պրոտեինազ K-ն կարող է նաև քայքայել RNase-ը՝ կանխելով վիրուսային RNA-ի քայքայումը և հեշտացնելով նուկլեինաթթվի հայտնաբերումը:
Պրոտեինազ K-ի գիշերային համբավը
Անկախ նրանից՝ գիտական հետազոտությունների, թե IVD-ի ոլորտում, նուկլեինաթթվի արդյունահանումը ամենահիմնական փորձն է, ուստի պրոտեինազ K-ն միշտ էլ շատ կարևոր գոյություն է ունեցել: Այնուամենայնիվ, անցյալում պրոտեինազ K-ն շատ ավելի քիչ հայտնի էր, քան դրա դերը: Դրա մեծ մասը պայմանավորված էր նրանով, որ պրոտեինազ K-ի մատակարարման և պահանջարկի հարաբերությունը շատ կայուն էր: Քչերը կմտածեին, որ պրոտեինազ K-ի մատակարարումը խնդիր կլինի:
Նոր թագի համաճարակի բռնկման հետ մեկտեղ նուկլեինաթթվի թեստավորման պահանջարկը կտրուկ աճել է: 2020 թվականի հունիսի վերջի դրությամբ Չինաստանում իրականացվել է մոտ 90 միլիոն նոր թագի թեստ, և այս թիվն ավելի մտահոգիչ է համաշխարհային մասշտաբով: Նուկլեինաթթվի արդյունահանման փորձարկումներում պրոտեինազ K-ի աշխատանքային կոնցենտրացիան մոտ 50-200 մկգ/մլ է: Ընդհանուր առմամբ, նուկլեինաթթվի նմուշ արդյունահանելու համար անհրաժեշտ է մոտ 100 մկգ պրոտեինազ K: Իրական օգտագործման դեպքում, նուկլեինաթթվի արդյունահանման արդյունավետությունը բարձրացնելու համար, պրոտեինազ K-ն հաճախ օգտագործվում է մեծ քանակությամբ: Նոր կորոնավիրուսի նուկլեինաթթվի հայտնաբերումը հանգեցրել է պրոտեինազ K-ի մեծ պահանջարկի: Պրոտեինազ K-ի սկզբնական մատակարարման և պահանջարկի հավասարակշռությունը արագորեն խախտվել է, և պրոտեինազ K-ն մեկ գիշերվա ընթացքում դարձել է համաճարակի կանխարգելման կարևոր նյութ:
Պրոտեինազ K-ի արտադրության դժվարություններ
Չնայած համաճարակի զարգացման հետ մեկտեղ մարդիկ գնահատել են պրոտեինազ K-ի կարևոր արժեքը, ամոթալի է, որ պրոտեինազ K-ի չափազանց ցածր մակարդակի պատճառով քիչ տեղական ընկերություններ են զբաղվել պրոտեինազ K-ի արտադրությամբ։ Երբ մարդիկ ցանկանում էին հաստատել պրոտեինազ K-ի արտադրություն, արտադրության գործընթացում պարզվեց, որ պրոտեինազ K-ն չափազանց յուրահատուկ սպիտակուց է։ Կարճ ժամանակահատվածում չափազանց դժվար է ընդլայնել պրոտեինազ K-ի արտադրական հզորությունը։
Պրոտեինազ K-ի մեծածավալ արտադրությունը բախվում է հետևյալ դժվարություններին.
1. Ցածր արտահայտություն
Պրոտեինազ K-ն կարող է ոչ սպեցիֆիկ կերպով քայքայել սպիտակուցների մեծ մասը և լուրջ թունավորություն առաջացնել արտահայտող հյուրընկալող բջջի համար։ Հետևաբար, պրոտեինազ K-ի արտահայտման մակարդակը, որպես կանոն, շատ ցածր է։ Պրոտեինազ K-ի բարձր արտահայտող արտահայտման համակարգերի և շտամների սկրինինգը, որպես կանոն, պահանջում է ավելի երկար ցիկլ։
2. Գունանյութերի և նուկլեինաթթուների մնացորդներ
Մեծածավալ խմորումը ներմուծում է մեծ քանակությամբ գունանյութ և տիրոջ նուկլեինաթթվային մնացորդներ։ Դժվար է հեռացնել այս խառնուրդները պարզ մաքրման գործընթացով, իսկ բարդ մաքրումը մեծացնում է արժեքը և նվազեցնում վերականգնման մակարդակը։
3. Անկայունություն
Պրոտեինազ K-ն բավականաչափ կայուն չէ, այն կարող է ֆերմենտացվել ինքն իրեն, և դժվար է այն երկար ժամանակ կայուն պահել 37°C ջերմաստիճանում առանց պաշտպանիչ նյութի։
4. Հեշտ է նստվածք տալ
Պրոտեներազ K-ի սառեցված-չորացրած փոշին պատրաստելիս, սառեցված-չորացրած փոշու մեջ պրոտեինազ K-ի պինդ նյութերի մեծ պարունակությունն ապահովելու համար անհրաժեշտ է ավելացնել սառեցված-չորացրած պաշտպանիչ նյութ բարձր կոնցենտրացիայով, սակայն երբ պրոտեինազ K-ի կոնցենտրացիան հասնում է 20 մգ/մլ և ավելիի, ագրեգացիան հեշտությամբ առաջացնում է նստվածք, որը մեծ դժվարություններ է առաջացնում բարձր պինդ նյութերի պարունակությամբ պրոտեինազ K-ի սառեցված-չորացման համար։
5. Մեծ ներդրում
Պրոտեինազ K-ն ունի ուժեղ պրոտեազային ակտիվություն և կարող է հիդրոլիզացնել այլ պրոտեազներ լաբորատորիայում: Հետևաբար, պրոտեինազ K-ն պահանջում է մասնագիտացված արտադրական տարածքներ, սարքավորումներ և անձնակազմ հետազոտությունների, զարգացման և արտադրության համար:
XD BIOCHEM-ի պրոտեինազա K լուծույթը
XD BIOCHEM-ը ունի հասուն սպիտակուցի արտահայտման և մաքրման հարթակ, ինչպես նաև հարուստ փորձ ունի ռեկոմբինանտ սպիտակուցների արտահայտման և մաքրման, ինչպես նաև արտադրական գործընթացների օպտիմալացման ոլորտում: Հետազոտությունների և զարգացման թիմի արագ ձևավորման շնորհիվ հաղթահարվել է պրոտեինազ K-ի մեծածավալ արտադրության գործընթացը: Լիովին չորացրած փոշու ամսական արտադրությունը կազմում է ավելի քան 30 կգ: Արտադրանքն ունի կայուն արդյունավետություն, բարձր ֆերմենտային սպեցիֆիկ ակտիվություն և չունի տիրոջ ցիտոքրոմ և նուկլեինաթթվային մնացորդներ: Բարի գալուստ կապվել XD BIOCHEM-ի հետ: Ստացեք փորձնական փաթեթ (էլ. փոստ՝sales@xdbiochem.comՀեռ․՝ +86 513 81163739):
XD BIOCHEM-ի տեխնիկական լուծումները ներառում են
Բազմակի պատճեն պլազմիդային ինտեգրման միջոցով ընտրվում են բարձր արտահայտման շտամներ՝ 8 գ/լ արտահայտման մակարդակով, ինչը հաղթահարում է պրոտեինազ K-ի ցածր արտահայտման մակարդակի խնդիրը։
Բազմաստիճան մաքրման գործընթացի ներդրման միջոցով, պրոտեինազ K-ի տիրոջ ցիտոքրոմը և նուկլեինաթթվային մնացորդները հաջողությամբ հեռացվեցին ստանդարտ արժեքից ցածր։
Պաշտպանիչ բուֆերային բանաձևերի բարձր թողունակության սկրինինգի միջոցով ընտրվել է այնպիսի բուֆեր, որը կարող է կայուն կերպով պահպանել պրոտեինազ K-ն 37°C ջերմաստիճանում։
Զննման բուֆերները հաղթահարում են այն խնդիրը, որ պրոտեինազ K-ն հեշտությամբ ագրեգացվում և նստվածք է առաջացնում բարձր կոնցենտրացիաների դեպքում, և հիմք են դնում պրոտեինազ K-ի բարձր պինդ պարունակությամբ սառեցման-չորացման համար։
XD BIOCHEM պրոտեինազ K նմուշ
XD BIOCHEM պրոտեինազ K կայունության թեստ. սենյակային ջերմաստիճանում 80 օր անց ակտիվության զգալի փոփոխություն չի լինի։
XD BIOCHEM պրոտեինազ K կայունության թեստ. սենյակային ջերմաստիճանում 80 օր անց ակտիվության էական փոփոխություն չի լինի։
XD BIOCHEM պրոտեինազ K-ի և մրցակից պրոդուկտների նուկլեինաթթվի արդյունահանման ազդեցության համեմատություն: Նուկլեինաթթվի արդյունահանման գործընթացում համապատասխանաբար օգտագործվում են XD BIOCHEM-ը և մրցակցային պրոտեինազ K-ն: XD BIOCHEM պրոտեինազ K-ի արդյունահանման արդյունավետությունն ավելի բարձր է, իսկ թիրախային գենի Ct արժեքը՝ ավելի ցածր:
Հրապարակման ժամանակը. Դեկտեմբերի 31-2021